28°C వద్ద 25 రోజుల పాటు నిశ్చల ఇంక్యుబేషన్ చేసిన తర్వాత, *ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రేటస్* NRC620 నుండి వచ్చిన లాకేస్ శిలీంధ్ర కల్చర్ మాధ్యమంలో అత్యధిక క్రియాశీలతను కనబరిచింది. ఈ ఎంజైమ్కు అనువైన pH మరియు ఉష్ణోగ్రత విలువలు వరుసగా 3.0 మరియు 70°C. 40°C మరియు 50°C వద్ద 2 గంటల ఇంక్యుబేషన్ తర్వాత, ఎంజైమ్ క్రియాశీలత వరుసగా 68.33% మరియు 59.61% నిలుపుకుంది. సిట్రేట్-ఫాస్ఫేట్ బఫర్ (pH 7.0)లో 2 గంటల ఇంక్యుబేషన్ తర్వాత, ఎంజైమ్ క్రియాశీలత 100% వద్ద నిలిచిపోయింది. 10 mM MgSO₄ మరియు CuSO₄ కలపడం వల్ల ఎంజైమ్ క్రియాశీలత వరుసగా సుమారుగా 21% మరియు 35% పెరిగింది, అయితే NaCl, MnCl₂, KCl, మరియు CaCl₂ ఎంజైమ్ క్రియాశీలతను నిరోధించాయి. ABTSను సబ్స్ట్రేట్గా ఉపయోగించినప్పుడు, *ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రియేటస్* NRC 620 లాకేస్ యొక్క కైనెటిక్ పారామీటర్లు (Km మరియు Vmax) వరుసగా 1.99 mM మరియు 16,217 μmol min−1 L−1గా ఉన్నాయి. ఆపిల్ జ్యూస్ నమూనాలకు ఎంజైమాటిక్ చికిత్స చేయడం వల్ల pH మరియు స్నిగ్ధత రెండూ గణనీయంగా తగ్గాయి, మరియు ఈ తగ్గుదల నిల్వ సమయం పెరగడంతో సంబంధం కలిగి ఉంది. లాకేస్ చికిత్స ఫలితంగా ఆపిల్ జ్యూస్లోని మొత్తం ఫినాలిక్ పదార్థం కొద్దిగా తగ్గింది, కానీ యాంటీఆక్సిడెంట్ చర్యలో ఎటువంటి తగ్గుదల గమనించబడలేదు.
ఇటీవలి సంవత్సరాలలో, పరిశోధకులు ఆహార పరిశ్రమలో హరిత జీవసాంకేతికత యొక్క అనువర్తనంపై దృష్టి సారించారు. లాక్కేస్ అనేది ఆహార పరిశ్రమలో అత్యంత ఉపయోగకరమైన ఎంజైమ్లలో ఒకటి. దీనిని రసం తయారీ, బేకింగ్, వైన్ స్థిరీకరణ, మరియు ఆహార ఉత్పత్తుల యొక్క ఇంద్రియ గుణాలను మెరుగుపరచడం వంటి రంగాలలో ఉపయోగిస్తారు.1అనేక ఉన్నత శ్రేణి మొక్కలు మరియు సూక్ష్మజీవులు లాక్కేస్ను స్రవిస్తాయి,2మరియు డ్యూటెరోమైసెట్స్, ఆస్కోమైసెట్స్ మరియు బాసిడియోమైసెట్స్ వంటి శిలీంధ్రాలు కూడా లాకేస్ను ఉత్పత్తి చేయగలవు.3లాకేస్ (EC 1.10.3.2) అనేది ఒక బ్లూ ఆక్సిడేస్, ఇది మూడు వేర్వేరు రాగి పరమాణువులతో కూడిన వ్యవస్థను ఉపయోగించి అణు ఆక్సిజన్ను నీరుగా తగ్గిస్తుంది, తద్వారా వివిధ ఫినోలిక్ సమ్మేళనాలు మరియు సుగంధ అమైన్లను ఆక్సీకరణం చేస్తుంది. పండ్లు మరియు కూరగాయల రసాల ఉత్పత్తి సమయంలో, ఎంజైమాటిక్ మరియు నాన్-ఎంజైమాటిక్ బ్రౌనింగ్ అనేవి కీలకమైన సమస్యలు.4ఈ పదార్థాలు రసం యొక్క రంగు, రుచి మరియు సువాసనను ప్రతికూలంగా ప్రభావితం చేస్తాయి కాబట్టి, వాటిని తప్పనిసరిగా తొలగించాలి.5
అన్ని పండ్లలో, ప్రపంచవ్యాప్తంగా మరియు యూరోపియన్ యూనియన్లో ఆపిల్ పండ్లనే ఎక్కువగా వినియోగిస్తారు. 2019లో, ఆపిల్ ఉత్పత్తి 87 మిలియన్ టన్నులకు పైగా ఉండి, ప్రపంచవ్యాప్తంగా మూడవ స్థానంలో నిలిచింది.6ఆపిల్ పండ్లలో ఫ్లేవనాయిడ్లు మరియు కెఫిక్ ఆమ్లం, క్లోరోజెనిక్ ఆమ్లం వంటి ఫినోలిక్ ఆమ్లాలతో సహా అనేక ఫినోలిక్ సమ్మేళనాలు ఉంటాయి.7ఆపిల్ జ్యూస్ను సాధారణంగా స్పష్టమైన రూపంలో తీసుకుంటారు కాబట్టి, వడపోత ప్రక్రియలో సుమారు 50% నుండి 90% ఫినాలిక్ భాగాలు నష్టపోతాయి.8ఈ రోజుల్లో, వినియోగదారులు అధిక పాలిఫెనాల్ కంటెంట్ ఉన్న మబ్బుగా ఉండే ఆపిల్ జ్యూస్ వంటి, తక్కువగా ప్రాసెస్ చేయబడిన ఉత్పత్తులను ఎంచుకుంటున్నారు. అయితే, దీనిలో ఫినాలిక్ కంటెంట్ ఎక్కువగా ఉండటం వల్ల, ఈ రకమైన ఆపిల్ జ్యూస్ రంగు మారడానికి మరియు నల్లబడటానికి ప్రత్యేకంగా గురవుతుంది.9ఆపిల్ రసం నల్లబడటాన్ని తగ్గించడానికి లేదా నివారించడానికి, 60–90°C వద్ద పాశ్చరైజేషన్ వంటి ఉష్ణ చికిత్సా పద్ధతులతో సహా వివిధ సాంకేతికతలు ఉపయోగించబడతాయి.10అయితే, Sauceda-Gálvez పరిశోధన ప్రకారం11ఉష్ణ ప్రక్రియ, అస్థిర రసాయనాలను నాశనం చేయగలదు మరియు ఆపిల్ రసం యొక్క ఇంద్రియ గుణాలను ప్రభావితం చేయగలదు. ఉష్ణ ప్రక్రియ పద్ధతులకు ప్రత్యామ్నాయాలలో సూపర్క్రిటికల్ కార్బన్ డయాక్సైడ్, అతినీలలోహిత వికిరణం, అల్ట్రాసౌండ్, అధిక హైడ్రోస్టాటిక్ పీడనం లేదా అధిక-పీడన హోమోజెనైజేషన్ ఉన్నాయి.12ఈ సాంకేతికతల సామర్థ్యం మరియు తగిన పండ్ల రసాల దిగుబడి అనేవి ఉపయోగించిన పారామితులు మరియు ఉత్పత్తి లక్షణాలపై ఆధారపడి ఉంటాయి. అధిక ఖర్చులు, కొన్ని ఆహార ఉత్పత్తుల నాణ్యతపై ప్రతికూల ప్రభావాలు లేదా ఎంజైమ్ల నిర్వీర్యం సరిపోకపోవడం వంటి కారణాల వల్ల వీటి విస్తృత వినియోగం పరిమితంగా ఉంది.13,14
పండ్ల రసాన్ని స్థిరీకరించడానికి మరియు స్పష్టం చేయడానికి లాక్కేస్ను ఉపయోగించవచ్చు.15గోక్మెన్ మరియు ఇతరులు.16పండ్ల రసం యొక్క స్పష్టీకరణ కోసం లాకేస్ వాడకాన్ని సిఫార్సు చేస్తున్నాము, ఎందుకంటే ఇది ఫినాలిక్ సమ్మేళనాలను పాలిమర్లు లేదా ఒలిగోమర్లుగా మార్చడం ద్వారా సమర్థవంతంగా తొలగిస్తుంది. ఈ పాలిమర్లు లేదా ఒలిగోమర్లను ఏ అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్ మెంబ్రేన్ ద్వారా అయినా సులభంగా తొలగించవచ్చు, దీనివల్ల ఆపిల్ రసం 50°C వద్ద ఆరు వారాల వరకు స్థిరమైన రంగును మరియు స్పష్టతను నిలుపుకుంటుంది. శుద్ధి చేసిన *ట్రైకోడెర్మా* లాకేస్ను అల్యూమినా పూసలపై స్థిరీకరించి, ఆపిల్ రసంలో సూక్ష్మజీవుల కాలుష్యం వల్ల కలిగే అవాంఛనీయ రుచి సమ్మేళనాలను ఎంపికగా తొలగించడానికి ఉపయోగించారు.17
ఆపిల్ జ్యూస్లోని అస్థిర భాగాలలో సుమారు 80-90% ఎస్టర్లు మరియు ఆల్డిహైడ్లు ఉంటాయి, ఇవి జ్యూస్కు ఒక ప్రత్యేకమైన సువాసనను అందిస్తాయి.18ఆపిల్ రసం శుద్ధి చేయడం కోసం, లేత కొబ్బరి చిప్పల నుండి తీసిన సహజ పీచుతో తయారు చేసిన చవకైన ఆధారంపై *ట్రామెట్స్ వెర్సికలర్* జాతికి చెందిన లక్కేస్ను కదలకుండా స్థిరపరిచారు.19గత అధ్యయనాలు ఎంజైమ్ రహిత లేదా ఇమ్మొబిలైజేషన్ పద్ధతులను ఉపయోగించి, లేదా అల్ట్రాఫిల్ట్రేషన్తో కలిపి ఆపిల్ జ్యూస్ యొక్క స్థిరీకరణను (రంగు మరియు మబ్బుగా ఉండటం) పరిశోధించాయి.5,19అయితే, నిల్వ సమయంలో ఆపిల్ జ్యూస్ యొక్క భౌతిక రసాయన లక్షణాలపై శిలీంధ్ర లాకేస్ల ప్రభావం ఇంకా అస్పష్టంగానే ఉంది. అందువల్ల, శిలీంధ్ర లాకేస్లతో శుద్ధి చేసి, రెండు వారాల పాటు రిఫ్రిజిరేటర్లో నిల్వ చేసిన తర్వాత ఆపిల్ జ్యూస్ యొక్క భౌతిక రసాయన లక్షణాలు, ఫినాలిక్ సమ్మేళనాల పరిమాణం, మరియు యాంటీఆక్సిడెంట్ చర్యలో కలిగే మార్పులను ప్రయోగాత్మకంగా పరిశోధించడమే ఈ అధ్యయనం యొక్క లక్ష్యం. లాకేస్లకు ఫినాలిక్ సమ్మేళనాలను ఆక్సీకరణం చేసే సామర్థ్యం ఉంది, ఇది జ్యూస్ స్పష్టీకరణతో సహా వివిధ పారిశ్రామిక ప్రక్రియలలో వాటి వినియోగానికి ఆశాజనకంగా చేస్తుంది. ఈ అధ్యయనం *ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రియేటస్* NRC 620 నుండి లభించే లాకేస్లను పరిశీలించింది, జ్యూస్ స్పష్టీకరణలో వాటి క్రియాశీలత మరియు సమర్థతకు అనువైన పరిస్థితులపై దృష్టి సారించింది. ఆయిస్టర్ పుట్టగొడుగులపై (P. ostreatus NRC 620) పరిశోధన ఇంకా పరిమితంగా ఉన్నప్పటికీ, గత అధ్యయనాలు ట్రామెటెస్ వెర్సికలర్ మరియు గనోడెర్మా లూసిడమ్ వంటి వివిధ శిలీంధ్ర మూలాల నుండి లభించే ఎంజైమ్లను పరిశీలించాయి. ఆహార పరిశ్రమలో ఈ ఎంజైమ్ యొక్క సంభావ్య అనువర్తనాన్ని మూల్యాంకనం చేయడం మరియు దాని ప్రత్యేక లక్షణాలను, ముఖ్యంగా దాని అనువైన pH మరియు ఉష్ణోగ్రతను హైలైట్ చేయడమే ఈ అధ్యయనం యొక్క లక్ష్యం.
2,2′-అజూఆక్సీబిస్(3-ఇథైల్బెంజోథియాజోలిన్-6-సల్ఫోనిక్ యాసిడ్) (ABTS)ను సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్ (కెనడా) నుండి కొనుగోలు చేయడం జరిగింది. మిగిలిన అన్ని రియేజెంట్లు అనలిటికల్ గ్రేడ్కు చెందినవి.
జాతీయ పరిశోధనా కేంద్రం యొక్క మైక్రోబియల్ కల్చర్ కలెక్షన్ సెంటర్, తెలిసిన ఆయిస్టర్ మష్రూమ్ స్ట్రెయిన్ NRC620ను సేకరించింది. సబ్కల్చర్ తర్వాత, ఈ స్ట్రెయిన్ను 4°C వద్ద పొటాటో డెక్స్ట్రోస్ అగర్ స్లాంట్స్పై నిల్వ చేశారు. ఇనాక్యులమ్ తయారీ పద్ధతి ఈ క్రింది విధంగా ఉంది: 10 రోజుల వయస్సు గల, పూర్తిగా అభివృద్ధి చెందిన మైసీలియంను పొటాటో డెక్స్ట్రోస్ అగర్ ప్లేట్లపై ఇనాక్యులేట్ చేసి, 28°C వద్ద ఇంక్యుబేట్ చేశారు. 10 రోజుల తర్వాత, స్టెరైల్ మెటల్ పంచ్ ఉపయోగించి అగర్ మీడియా నుండి 12-మిమీ వ్యాసం గల మూడు మైసీలియల్ బ్లాక్లను తీసి, 50 మి.లీ స్టెరిలైజ్డ్ కల్చర్ మీడియం (pH 5.0, గతంలో ఒత్మాన్ మరియు ఇతరులు వివరించిన విధంగా) ఉన్న కాటన్ ప్లగ్లతో కూడిన 250-మి.లీ ఎర్లెన్మేయర్ ఫ్లాస్క్లలో ఉంచారు.20కల్చర్లను 28°C వద్ద 18 రోజుల పాటు ఇంక్యుబేట్ చేశారు. ఆ తర్వాత కల్చర్లను వాట్మాన్ నెం. 1 ఫిల్టర్ పేపర్ ద్వారా ఫిల్టర్ చేయగా, ఫలితంగా వచ్చిన సూపర్నాటెంట్ ఎంజైమ్ మూలంగా ఉపయోగపడింది.
ABTS ను సబ్స్ట్రేట్గా ఉపయోగించి లాక్కేస్ చర్యను నిర్ధారించారు. చర్య మిశ్రమం (2 mL)లో 500 μL 0.3 mM ABTS (0.1 M సోడియం సిట్రేట్ బఫర్, pH 4.5లో కరిగించినది) మరియు స్వేదన జలంతో పలుచన చేసిన అవసరమైన ఎంజైమ్ నమూనా పరిమాణం ఉన్నాయి.21,22లాకేస్ గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద (28 °C ± 2) ABTSను ఆక్సీకరణం చేయగలదని పరిగణనలోకి తీసుకుని, 420 nm (ε) వద్ద శోషణలో పెరుగుదలను కొలవడం ద్వారా ABTS ఆక్సీకరణను నిర్ధారించారు.420= 36,000 సెం.మీ-1 M -1అజిలెంట్ క్యారీ-100 UV స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్ను ఉపయోగించి. నిమిషానికి 1 μmol ABTSను ఆక్సీకరణం చేయడానికి ఒక యూనిట్ లాకేస్ చర్య అవసరం. అంతర్గత నియంత్రణగా బోవైన్ సీరం ఆల్బుమిన్ను ఉపయోగించి బ్రాడ్ఫోర్డ్ పద్ధతి ద్వారా ప్రోటీన్ గాఢతను నిర్ణయించారు.23,24
NRC 620 అనే ఆయిస్టర్ మష్రూమ్ స్ట్రెయిన్ నుండి ఎంజైమ్ను పొందిన తర్వాత, 28 °C వద్ద స్థిర పరిస్థితులలో 25 రోజుల పాటు వివిధ సాగు వ్యవధులలో దాని కార్యాచరణను కొలిచారు.
లాకేస్ చర్యపై ఉష్ణోగ్రత ప్రభావాన్ని అధ్యయనం చేయడానికి, 20 నుండి 90 °C ఉష్ణోగ్రత పరిధిలో ప్రయోగాలు నిర్వహించబడ్డాయి. ఎంజైమ్ను జోడించి, చర్యను ప్రారంభించడానికి ముందు, బఫర్ (0.1 M సోడియం సిట్రేట్, pH 4.5) మరియు సబ్స్ట్రేట్ (ABTS) లను కలిపి, వివిధ ఉష్ణోగ్రతల వద్ద 5 నిమిషాల పాటు ఇంక్యుబేట్ చేశారు. ఎంజైమ్ ఉష్ణ స్థిరత్వాన్ని అంచనా వేయడానికి, 0.05 M సోడియం ఫాస్ఫేట్ బఫర్ (pH 7.0) లో వరుసగా 40, 50, 60, మరియు 70 °C వద్ద 2 గంటల పాటు ఇంక్యుబేట్ చేశారు. ఆ తర్వాత, ABTS సబ్స్ట్రేట్ను ఉపయోగించి అవశేష చర్యను అంచనా వేశారు.
2.5 నుండి 7.0 వరకు pH పరిధి గల 0.1 M సిట్రేట్-ఫాస్ఫేట్ బఫర్లలో ABTSను సబ్స్ట్రేట్గా ఉపయోగించి లాకేస్ చర్యపై pH ప్రభావాన్ని అంచనా వేశారు. pH స్థిరత్వాన్ని అంచనా వేయడానికి, ఎంజైమ్ ద్రావణాన్ని 0.1 M సిట్రేట్ మరియు ట్రిస్ బఫర్లలో (pH 3, 4, 6, మరియు 7) 40°C వద్ద రెండు గంటల పాటు ఇంక్యుబేట్ చేశారు. ఇంక్యుబేషన్ తర్వాత, సబ్స్ట్రేట్గా ABTSతో మిగిలిన చర్యను లెక్కించారు.
వివిధ లోహ అయాన్లు (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, మరియు Mn2+) వరుసగా 2.5 mM మరియు 10 mM గాఢతలలో ఉన్న సోడియం ఫాస్ఫేట్ బఫర్ (0.05 M, pH 7.0)లో లాకేస్ను 10 నిమిషాల పాటు ఇంక్యుబేట్ చేశారు. ఆ తర్వాత, చర్యను ప్రారంభించడానికి సబ్స్ట్రేట్ (ABTS)ను జోడించి, సాపేక్ష క్రియాశీలతను అంచనా వేశారు.
గతిశాస్త్ర పారామితులను (Vmax మరియు Km) నిర్ధారించడానికి, pH 4.5 వద్ద వివిధ గాఢతలలో (0.025–3 mM) లాక్కేస్ ద్వారా ABTS ఆక్సీకరణను కొలవడం జరిగింది.స్థిరాంకాలుమైఖేలిస్-మెంటెన్ సమీకరణం యొక్క గతిశాస్త్ర స్థిరాంకాలు లైనెవీవర్-బర్క్ ప్లాట్ను ఉపయోగించి లెక్కించబడ్డాయి. ఈ ప్లాట్, చర్య రేటు యొక్క విలోమాన్ని సబ్స్ట్రేట్ గాఢత యొక్క ప్రమేయంగా చూపుతుంది. గ్రాఫ్ప్యాడ్ ప్రిజం వెర్షన్ 6.01 సాఫ్ట్వేర్ను ఉపయోగించి లైనెవీవర్-బర్క్ ప్లాట్ నుండి గతిశాస్త్ర స్థిరాంకాలు లెక్కించబడ్డాయి.
ఆపిల్ పండ్లను కుళాయి నీటితో శుభ్రంగా కడిగిన తర్వాత, వాటిని సగానికి కోసి, పూర్తిగా ఆటోమేటిక్ అయిన (జర్మనీలో తయారైన) బ్రాన్ MP80 ఆపిల్ జ్యూసర్ను ఉపయోగించి రసం తీశారు. ఆ రసాన్ని నాలుగు పొరల చీజ్క్లాత్ ద్వారా వడపోశారు. నియంత్రణ సమూహానికి (కంట్రోల్ గ్రూప్) ఎటువంటి ఎంజైమ్లను కలపలేదు, అయితే తాజాగా తయారుచేసిన ఆపిల్ రసంలో 2.0% లాకేస్ను (పరీక్షించిన వాటిలో అత్యంత ప్రభావవంతమైన గాఢత) కలిపి, ఆ తర్వాత దానిని రెండు వారాల పాటు 4°C వద్ద నిల్వ చేశారు.
బౌల్టన్ మరియు ఇతరుల పద్ధతి ప్రకారం టైట్రేటబుల్ ఆమ్లత్వం (TA) మరియు pH నిర్ణయించబడ్డాయి.అల్.27ప్రతి నమూనా యొక్క pH ను డిజిటల్ pH మీటర్ (జెన్వే 3510 pH మీటర్) ఉపయోగించి కొలిచారు. కింది సూత్రాన్ని ఉపయోగించి మాలిక్ ఆమ్లం ఆధారంగా టైట్రేటబుల్ ఆమ్లత (TA) ను లెక్కించారు.
ఇక్కడ V మరియు C అనేవి టైట్రేషన్లో ఉపయోగించిన సోడియం హైడ్రాక్సైడ్ ద్రావణం యొక్క ఘనపరిమాణం (mL) మరియు గాఢత (0.1 mol/L). K అనేది మాలిక్ ఆమ్ల మార్పిడి గుణకం, దీని విలువ 0.067, మరియు W అనేది ఆపిల్ జ్యూస్ యొక్క ద్రవ్యరాశి (గ్రాములు).
మొత్తం కరిగే ఘనపదార్థాలు (టీడీఎస్అన్ని జ్యూస్ నమూనాలలోని (ఐస్) కంటెంట్ను PAL-1 పాకెట్ రిఫ్రాక్టోమీటర్ (ATAGO, టోక్యో, జపాన్) ఉపయోగించి నిర్ణయించారు. ప్రతి కొలత తర్వాత, ఆప్టికల్ లెన్స్ను డీయోనైజ్డ్ నీటితో కడిగి, ప్రతి ఆపిల్ జ్యూస్ నమూనాను మూడుసార్లు పరీక్షించారు. మూడు కొలతల సగటును లెక్కించడం ద్వారా ప్రతి నమూనా విలువను నిర్ధారించారు. ఈ ఫలితాల సగటును లెక్కించడం ద్వారా ప్రతి ఆపిల్ జ్యూస్ నమూనా యొక్క సగటు ± ప్రామాణిక విచలనాన్ని కూడా లెక్కించారు.
ఆపిల్ జ్యూస్ నమూనాల విస్కోఎలాస్టిసిటీని రొటేషనల్ విస్కోమీటర్ (RV, రియోటెస్ట్ 2, జర్మనీ) ఉపయోగించి అంచనా వేశారు. నమూనాను విస్కోమీటర్ యొక్క “S2” సిలిండర్ లోపల ఉంచారు. వివిధ షియర్ రేట్ల (1.00 నుండి 437.4 s⁻¹ వరకు) వద్ద షియర్ స్ట్రెస్ మరియు సంబంధిత కర్వ్ల నుండి లెక్కించబడిన షియర్ స్ట్రెస్ వర్సెస్ షియర్ రేట్ కర్వ్ యొక్క వాలు ద్వారా అపారెంట్ విస్కోసిటీని సూచించారు. అపారెంట్ విస్కోసిటీని లెక్కించడానికి సూత్రం ఈ క్రింది విధంగా ఉంది:
ఇక్కడ η అనేది దృశ్య స్నిగ్ధత (cP), τ అనేది కోత ఒత్తిడి (dyn/cm²), γ అనేది కోత రేటు (sec⁻¹), మరియు (τ) ను టార్క్ (α) మరియు సిలిండర్ (Z) విలువలను ఉపయోగించి ఈ క్రింది సూత్రం ద్వారా లెక్కిస్తారు: τ = Z . α.
మెయిడావ్ పద్ధతి ప్రకారం బ్రౌనింగ్ సూచికను నిర్ణయించారు.అల్.2910 మి.లీ. రసం నమూనాని 2750 xg వద్ద 10 నిమిషాల పాటు సెంట్రిఫ్యూజ్ చేశారు. రసం సూపర్నాటెంట్ నుండి 5 మి.లీ. తీసుకుని, దానిని 5 మి.లీ. 95% ఇథనాల్తో కలిపారు. ఈ మిశ్రమం యొక్క అబ్సార్బెన్స్ను షిమాడ్జు UV స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్ (UV-1601 PC) ఉపయోగించి 420 nm వద్ద కొలిచారు.
బౌల్టన్ మరియు ఇతరులు వివరించిన విధంగా ఫోలిన్-సియోకాల్ట్యూ రియాజెంట్ను ఉపయోగించి మొత్తం ఫినాలిక్ కంటెంట్ (TPC) కలరిమెట్రిక్గా నిర్ణయించబడింది.[270 నుండి 500 mg/L వరకు గల గాఢతల కోసం గాలిక్ ఆమ్లం యొక్క ప్రామాణిక వక్రరేఖను నిర్మించారు (r²= 0.997). ఫలితాలు గాలిక్ యాసిడ్ సమానతలుగా (mg GAE/mL) వ్యక్తీకరించబడ్డాయి.
25 μL ఆపిల్ జ్యూస్కు 125 μL స్వేదన జలం మరియు 2850 μL FRAP ద్రావణాన్ని కలిపి, ఆ మిశ్రమాన్ని చీకటిలో ఉంచండి.30నిమిషం. తరువాత షిమాడ్జు UV స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్ (UV-1601 PC) ఉపయోగించి 593 nm వద్ద శోషణను కొలవండి. FRAP రియేజెంట్ను 300 mM అసిటేట్ బఫర్ (pH 3.6), 20 mM ఐరన్(III) క్లోరైడ్, మరియు 10 mM 2,4,6-ట్రిస్(2-పిరిడైల్)ట్రయాజైన్ (TPTZ) (40 mM HClలో కరిగించినది) లను 10:1:1 నిష్పత్తిలో కలపడం ద్వారా తయారుచేయబడింది. ట్రోలాక్స్ను స్టాండర్డ్గా ఉపయోగించి ఒక స్టాండర్డ్ కర్వ్ రూపొందించబడింది (R²= 0.999), మరియు ఫలితాలు μM ట్రోలాక్స్/mL గా వ్యక్తీకరించబడ్డాయి.
DPPH ఫ్రీ రాడికల్స్ను తొలగించే వాటి సామర్థ్యాన్ని అంచనా వేయడానికి, శుద్ధి చేసిన మరియు శుద్ధి చేయని రసాల యొక్క యాంటీఆక్సిడెంట్ చర్యను DPPH పద్ధతిని ఉపయోగించి నిర్ధారించారు.31పది మైక్రోలీటర్ల రసాన్ని, మిథనాల్లోని 1 ml DPPH ద్రావణంతో (100 μM) కలిపారు. 30 నిమిషాల పాటు చీకటిలో చర్య జరిపిన తర్వాత, షిమాడ్జు UV స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్ (UV-1601 PC) ఉపయోగించి, ఆ మిశ్రమం యొక్క శోషణను 517 nm వద్ద కొలిచారు. ఫలితాలను ఒక క్రమాంకన వక్రరేఖ ఆధారంగా ట్రోలాక్స్ తుల్యాలుగా (μM ట్రోలాక్స్/ml) వ్యక్తీకరించారు.R2= 0.990).
పొందిన డేటా ప్రకారం, కిణ్వ ప్రక్రియ యొక్క 18వ రోజు చివరి నాటికి NRC 620 ఆయిస్టర్ పుట్టగొడుగులలో గరిష్ట లాక్కేస్ ఉత్పత్తి గమనించబడింది, ఇది 1302 U/L క్రియాశీలతను చేరుకుంది. లాక్కేస్ ఉత్పత్తికి అనువైన సాగు సమయాన్ని నిర్ధారించడానికి ఇది ఆధారంగా పనిచేసింది (మూర్తి 1). సాగు సమయం పెరిగే కొద్దీ ఎంజైమ్ ఉత్పత్తి పెరిగినప్పటికీ, పెరుగుదల రేటు సాగు సమయానికి నేరుగా అనుపాతంలో లేదు; 21 రోజుల తర్వాత, ఎంజైమ్ క్రియాశీలత కేవలం 90 U/L (1390 U/L కు) మాత్రమే పెరిగింది. అందువల్ల, ఉత్పత్తి దిగుబడిని మరియు పెరిగిన సాగు సమయం యొక్క ఆర్థిక ప్రయోజనాలను సమతుల్యం చేయడానికి, 18 రోజులను చివరకు అనువైన సాగు సమయంగా ఎంపిక చేశారు.
ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రియేటస్ NRC 620లో లాకేస్ దిగుబడిపై సాగు సమయం యొక్క ప్రభావం. మూడు (12 మి.మీ.) శిలీంధ్ర మైసీలియల్ బ్లాక్లను 50 మి.లీ. శుభ్రమైన మాధ్యమంలోకి ఎక్కించి, ఆపై 28 °C వద్ద వివిధ సమయాల పాటు సాగు చేశారు.
ఇతర అధ్యయనాలకు అనుగుణంగా, శిలీంధ్రాల ద్వారా గరిష్ఠ లాక్కేస్ స్రావాన్ని సాధించడానికి అనువైన కల్చర్ కాలం 7 నుండి 36 రోజుల మధ్య ఉండే అవకాశం ఉందని మా ఫలితాలు సూచిస్తున్నాయి.32ఎజికే మరియు ఇతరుల ప్రకారం.33, *ట్రామెట్స్ పాలిజోనా* WRF03 కిణ్వ ప్రక్రియ యొక్క తొమ్మిదవ రోజు చివరి నాటికి అత్యధిక మొత్తంలో లాకేస్ను ఉత్పత్తి చేసింది, దీని నిర్దిష్ట క్రియాశీలత 1637 U/mg ప్రోటీన్. ఇంకా, ఓత్మాన్ మరియు ఇతరులు.34కల్చర్ చేసిన ఐదవ రోజున *ట్రైకోడెర్మా హార్జియానం* S7113 అధిక మొత్తంలో లాక్కేస్ను స్రవించిందని కనుగొనబడింది. లాక్కేస్ ఉత్పత్తి రేటు పద్నాలుగో రోజున గరిష్ట స్థాయికి చేరుకుని, ఆ తర్వాత క్రమంగా తగ్గింది.34ప్రధాన పెరుగుదల దశలో కూడా ఎంజైమ్ స్రావం జరగగలిగినప్పటికీ, ఇది సాధారణంగా మధ్యంతర దశలో గరిష్ట స్థాయికి చేరుకుంటుంది మరియు కార్బన్ లేదా నత్రజని వనరు వినియోగం ద్వారా ప్రేరేపించబడుతుంది.34,35
ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రేటస్ NRC 620 నుండి లభించే లాకేస్, 50°C నుండి 80°C వరకు విస్తృత ఉష్ణోగ్రతా పరిధిలో అధిక క్రియాశీలతను ప్రదర్శించినప్పటికీ, గరిష్ట క్రియాశీలత (69–98%)కు చేరువలో, దాని గరిష్ఠ క్రియాశీలత 70°C వద్ద గమనించబడింది (పటం 2a). ఈ ఉష్ణోగ్రతా పరిధికి వెలుపల, సుమారుగా 70°C వద్ద ఎంజైమ్ క్రియాశీలత తగ్గింది. ఈ ఫలితాలు ఎంజైమ్ అధిక ఉష్ణోగ్రతల వద్ద చురుకుగా ఉంటుందని సూచిస్తున్నాయి, బహుశా అధిక ఉష్ణోగ్రత చర్య యొక్క గతిజ శక్తిని పెంచడమే దీనికి కారణం కావచ్చు.
*ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రేటస్* NRC 620 లో లాక్కేస్ చర్యపై చర్య ఉష్ణోగ్రత (a) మరియు pH (b) యొక్క ప్రభావం. ఎంజైమ్ను జోడించి, చర్యను ప్రారంభించడానికి ముందు మిశ్రమాన్ని వివిధ ఉష్ణోగ్రతల వద్ద 5 నిమిషాల పాటు ముందుగా ఇంక్యుబేట్ చేయడం ద్వారా 20 నుండి 90 °C వరకు ఉష్ణోగ్రతలు సాధించబడ్డాయి. 2.5 నుండి 7.0 వరకు pH పరిధిలో 0.1 M సిట్రేట్-ఫాస్ఫేట్ బఫర్ను కలిగి ఉన్న ద్రావణాలలో ABTS ను సబ్స్ట్రేట్గా ఉపయోగించి లాక్కేస్ చర్యపై pH యొక్క ప్రభావం అంచనా వేయబడింది.
ఎజికే మరియు ఇతరుల ప్రకారంఅల్.33ట్రామెట్స్ పాలిజోనా WRF03 లాకేస్కు అనుకూలమైన ఉష్ణోగ్రత 55 °C, ఇది గనోడెర్మా లూసిడమ్కు కూడా అనుకూలంగా ఉంటుంది.లాకేస్36మరియు *ట్రామెట్స్ పాలిజోనా* KU-RNW02737 కు అనువైన ఉష్ణోగ్రత (50 °C) మాదిరిగానేలాకేస్ . బాల్డ్రియన్38ఇతర లిగ్నిన్-క్షీణించే ఎంజైమ్ వ్యవస్థల మాదిరిగానే, లాకేస్కు కూడా ఆదర్శ ఉష్ణోగ్రత పరిధి 50 మరియు 70 °C మధ్య ఉంటుందని గమనించాలి.
ఫలితాలు చూపిన దాని ప్రకారం, ఈ ఎంజైమ్ pH 3.0 వద్ద అత్యధిక క్రియాశీలతను ప్రదర్శించింది, pH 3.5 వద్ద 94% క్రియాశీలతను చేరుకుంది. అయితే, ఇది 2.5 నుండి 7.0 వరకు విస్తృత pH పరిధిలో క్రియాశీలంగా ఉంది (పటం 2బి). అంతేకాకుండా, తటస్థ లేదా క్షార పరిస్థితులతో పోలిస్తే ఆమ్ల పరిస్థితులలో ఇది అధిక క్రియాశీలతను ప్రదర్శించింది. దీని క్రియాశీలత 2.5 నుండి 4.5 వరకు pH పరిధిలో కనీసం 77% వద్ద ఉంది, కానీ pH 7.0 వద్ద సుమారుగా 38% మాత్రమే చేరుకుంది. *ట్రామెటెస్ పాలిజోనా* WRF03 నుండి వచ్చిన లాకేస్ యొక్క ఆప్టిమమ్ pH 4.533, ఇది *ట్రామెటెస్ పాలిజోనా* KU-RNW02737, *ట్రైకోడెర్మా హర్జానియం* 39, *ప్లూరోటస్* sp. 40, మరియు *ట్రామెటెస్ హిర్సుటా* 41 నుండి వచ్చిన లాకేస్ల pH తో సమానంగా ఉంది. అయితే, చైరిన్ మరియు ఇతరుల అధ్యయనం ప్రకారం.42*పాలిమోర్ఫా ఎఫ్. ఎస్.పి.* WR710-1 నుండి లభించే లాకేస్కు అనుకూలమైన pH 2.2 కాగా, *పాలిమోర్ఫా ఎఫ్. ఎస్.పి.* IBL-04 నుండి లభించే లాకేస్కు అనుకూలమైన pH 5.043. తటస్థ లేదా క్షార pH పరిస్థితులలో లాకేస్ క్రియాశీలత తగ్గడానికి కారణం, T2/T3 లాకేస్లోని రాగి అణువులకు హైడ్రాక్సైడ్ అయాన్లు (లాకేస్ నిరోధకం) బంధించబడటమే కావచ్చు. ఇది T1 కేంద్రం నుండి T2/T3 కేంద్రానికి జరిగే అంతర్గత ఎలక్ట్రాన్ బదిలీకి అంతరాయం కలిగించవచ్చు, తద్వారాపరిమితం చేయడంఎంజైమ్ చర్య23,44
వివిధ ఉష్ణోగ్రతల వద్ద ఎంజైమ్ను ఇంక్యుబేట్ చేయడం ద్వారా, ఇంక్యుబేషన్ సమయం మరియు ఉష్ణోగ్రత రెండూ ఎంజైమ్ స్థిరత్వాన్ని ప్రభావితం చేస్తాయని కనుగొనబడింది. ముఖ్యంగా, *ట్రామెటెస్ పాలిజోనా* NRC 620 నుండి వచ్చిన లాకేస్ 40℃ మరియు 50℃ వద్ద అధిక స్థిరత్వాన్ని ప్రదర్శించింది, 120 నిమిషాల తర్వాత దాని ప్రారంభ క్రియాశీలతలో వరుసగా 68.33% మరియు 59.61% ని నిలుపుకుంది (పటం 3a). దీనికి విరుద్ధంగా, అదే పరిస్థితులలో (40℃ మరియు 50℃, 120 నిమిషాలు), *ట్రామెటెస్ పాలిజోనా* WRF03 నుండి వచ్చిన లాకేస్ దాని క్రియాశీలతలో వరుసగా 64.38% మరియు 42.92% ని నిలుపుకుంది.33దీనికి విరుద్ధంగా, ఇంక్యుబేషన్ సమయం మరియు ఉష్ణోగ్రతను పెంచడం వల్ల *ట్రామెట్స్ పాలిజోనా* NRC 620 లాకేస్ యొక్క స్థిరత్వం తగ్గింది; 60℃ మరియు 70℃ వద్ద 60 నిమిషాల పాటు ఇంక్యుబేషన్ చేసిన తర్వాత, దాని క్రియాశీలత వరుసగా 39.24% మరియు 1.72%కి తగ్గింది (పటం 3a). ప్రయోగాత్మక ఫలితాలకు అనుగుణంగా, *ట్రామెట్స్ పాలిజోనా* WRF03 నుండి వచ్చిన లాకేస్, ఉష్ణ చికిత్స ప్రక్రియ అంతటా 40 మరియు 50℃ వద్ద అధిక స్థిరత్వాన్ని చూపించింది.33అదేవిధంగా, Lueangjaroenkit etఅల్.37మరియు చైరిన్ ఎట్అల్.42ట్రామెటెస్ పాలిజోనా KURNW027 మరియు ట్రామెటెస్ పాలిజోనా WR710-1 నుండి లభించే లాకేస్ల స్థిరత్వాన్ని వరుసగా 50 °C వద్ద 1 గంట పాటు నివేదించారు. వివిధ జీవసాంకేతిక రంగాలలో ఉపయోగపడే ఒక జీవ ఉత్ప్రేరకంగా, లాకేస్ విస్తృత ఉష్ణోగ్రతా పరిధిలో మంచి స్థిరత్వం మరియు పనితీరును కలిగి ఉండాలి.
*ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రేటస్* NRC 620 నుండి లక్కేస్ యొక్క ఉష్ణస్థితిక స్థిరత్వం (a) మరియు pH స్థిరత్వం (b). ఉష్ణస్థితిక స్థిరత్వాన్ని అంచనా వేయడానికి, ఎంజైమ్ ద్రావణాన్ని 0.05 M సోడియం ఫాస్ఫేట్ బఫర్ (pH 7.0)లో వరుసగా 40, 50, 60, మరియు 70 °C వద్ద 2 గంటల పాటు ఇంక్యుబేట్ చేశారు. pH స్థిరత్వాన్ని అంచనా వేయడానికి, ఎంజైమ్ ద్రావణాన్ని 0.1 M సిట్రేట్ బఫర్ మరియు ట్రిస్ బఫర్ (pH 3, 4, 6, మరియు 7)లో 40 °C వద్ద 2 గంటల పాటు ఇంక్యుబేట్ చేశారు. ఇంక్యుబేషన్ తర్వాత ABTSను సబ్స్ట్రేట్గా ఉపయోగించి అవశేష క్రియాశీలతను లెక్కించారు.
ఎంజైమ్ వాడకం మరియు నిల్వ కోసం సరైన పరిస్థితులను నిర్ధారించడానికి, మేము లాక్కేస్ స్థిరత్వంపై pH ప్రభావాన్ని పరిశోధించాము. విభిన్న pH విలువలకు గురికావడం ప్రోటీన్ నిర్మాణం యొక్క స్థిరత్వాన్ని గణనీయంగా ప్రభావితం చేసింది, తద్వారా ఎంజైమ్ అణువు యొక్క స్థిరత్వం మరియు క్రియాశీలతను ప్రభావితం చేసింది. ఆమ్ల పరిస్థితులలో ఎంజైమ్ తక్కువ స్థిరంగా ఉందని, అయితే అధిక pH విలువల వద్ద (తటస్థ మరియు క్షార ప్రాంతాలు) ఇది మెరుగైన స్థిరత్వాన్ని ప్రదర్శించిందని ఫలితాలు చూపించాయి. 7.0, 6.0, 4.0, మరియు 3.0 pH విలువల వద్ద, 120 నిమిషాల తర్వాత ఎంజైమ్ నిలుపుదల రేట్లు వరుసగా సుమారుగా 100%, 62.54%, 52.39%, మరియు 11.14%గా ఉన్నాయి (పటం 3బి). *స్ట్రోంబస్ మల్టిసస్* WRF03 లాక్కేస్ తటస్థ pH విలువల వద్ద (5.5–6.5) అధిక స్థిరత్వాన్ని మరియు ఆమ్ల pH విలువల వద్ద (4.0 కంటే తక్కువ) తక్కువ స్థిరత్వాన్ని చూపించింది. 5.5, 6.0, మరియు 6.5 pH విలువల వద్ద 120 నిమిషాల తర్వాత, ఎంజైమ్ నిలుపుదల రేట్లు వరుసగా సుమారుగా 82%, 100%, మరియు 93% గా ఉన్నాయి.33ఖైరిన్ మరియు ఇతరులు.42ట్రామెటెస్ పాలిజోనా WR710-1 నుండి లభించే లాకేస్ 6.0 నుండి 7.0 pH పరిధిలో స్థిరంగా ఉంటుందని గమనించబడింది, అయితే సయ్యద్ మరియు ఇతరులు.45తటస్థ pH పరిస్థితులలో లాక్కేస్ మరింత స్థిరంగా ఉంటుందని తేలింది. అయితే, సెర్రెనా యునికలర్ నుండి లభించే లాక్కేస్ క్షార పరిస్థితులలో (pH 9.0) కూడా స్థిరత్వాన్ని ప్రదర్శించింది.46అధ్యయనం చేసిన లాకేస్లు విస్తృత pH పరిధిలో అధిక స్థిరత్వాన్ని ప్రదర్శించాయి. పారిశ్రామిక అనువర్తనాలకు ఇది ఒక ముఖ్యమైన లక్షణం కావచ్చు.
కొన్ని లోహ అయాన్లు ఎంజైమ్ కార్యకలాపాలపై ఉద్దీపన మరియు నిరోధక ప్రభావాలు రెండింటినీ కలిగి ఉన్నందున, పారిశ్రామిక అనువర్తనాలలో ఎంజైమ్ కార్యకలాపాలపై వాటి ప్రభావాలను తప్పనిసరిగా పరిగణించాలి. ఇది చాలా కీలకం, ఎందుకంటే లోహ అయాన్లు సాధారణ పర్యావరణ కాలుష్య కారకాలు, ఇవి కణబాహ్య ఎంజైమ్ల స్థిరత్వం మరియు సంశ్లేషణను ప్రభావితం చేయగలవు.47*ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రేటస్* NRC 620 నుండి లభించే లాకేస్పై బహుళ లోహ అయాన్ల ప్రభావాలను పరిశోధించడానికి, మేము సంబంధిత ప్రయోగాలను నిర్వహించాము. పటం 4లో చూపిన విధంగా, ఉపయోగించిన లోహం రకాన్ని బట్టి, లోహ అయాన్ గాఢతను 2.5 mM నుండి 10 mMకు పెంచడం ఎంజైమ్ పనితీరును ప్రతికూలంగా ప్రభావితం చేసింది. ఉదాహరణకు,Mg²⁺ , Co²⁺ , Zn²⁺మరియుCu²⁺ఎంజైమ్ కార్యకలాపాన్ని ప్రేరేపించి, సక్రియం చేయగలదు, అయితేNa⁺ , Mn²⁺ , Ca²⁺మరియుకె⁺ఎంజైమ్ చర్యను నిరోధించగలదు. 10 mM గాఢత వద్ద, Cu²⁺ మరియు Mg²⁺ అయాన్లు *ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రేటస్* NRC 620 నుండి లక్కేస్ చర్యకు అత్యంత శక్తివంతమైన ఉత్తేజకాలుగా ఉన్నాయి, ఇవి వరుసగా సుమారు 34% మరియు 20% ఉత్తేజ స్థాయిని అందించాయి. అయితే, 10 mM గాఢత వద్ద, Ca²⁺ అయాన్లు లక్కేస్కు అత్యంత శక్తివంతమైన నిరోధకాలుగా ఉన్నాయి, ఇవి ఎంజైమ్ చర్యను సుమారు 60% తగ్గించాయి.
ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రియేటస్ NRC 620 లాకేస్ యొక్క క్రియాశీలతపై లోహ అయాన్ల ప్రభావం. 2.5 mM మరియు 10 mM గాఢతలలో వివిధ లోహ అయాన్లను కలిగిన సోడియం ఫాస్ఫేట్ బఫర్ (0.05 M, pH 7.0)లో లాకేస్ను 10 నిమిషాల పాటు ఇంక్యుబేట్ చేశారు. ఆ తర్వాత సబ్స్ట్రేట్ (ABTS)ను కలపడం ద్వారా చర్యను ప్రారంభించి, అనంతరం సాపేక్ష క్రియాశీలతను కొలిచారు.
Mg²⁺ మరియు Cu²⁺ లు *ట్రామెట్స్ పాలిజోనా* WRF03³ యొక్క క్రియాశీలతను పెంచుతాయని కనుగొన్న ఇతర రచయితల ఫలితాలతో మా ఫలితాలు ఏకీభవిస్తున్నాయి. కాస్టానో మరియు ఇతరులు⁴⁸ *జైలేరియా* sp. నుండి లభించే లాకేస్, రాగి అయాన్ల (Cu²⁺) ద్వారా కొంత మేరకు ఉత్తేజితమవుతుందని కనుగొన్నారు. అంతేకాకుండా, ఫొరూటన్ఫార్ మరియు ఇతరులు⁴⁹ మరియు సి మరియు ఇతరులు⁵⁰ వరుసగా *పారాకోనియోథైరియం వేరియబుల్* మరియు *ట్రామెట్స్ ప్యూబెసెన్స్* నుండి లభించే లాకేస్లపై ఇలాంటి అధ్యయనాలను నిర్వహించారు. ఈ ఎంజైమ్ యొక్క టైప్ II రాగి-బంధన స్థానం (T2), ఒక నిర్దిష్ట గాఢత వద్ద Cu²⁺ తో సంతృప్తమవుతుంది, ఇది అధిక Cu²⁺³⁹ గాఢతల వద్ద లాకేస్ క్రియాశీలత ఉత్తేజితం కావడాన్ని వివరించవచ్చు. తెల్ల కుళ్ళిపోయే శిలీంధ్రాల లాక్కేస్లు బహుళ రాగి పరమాణువులను కలిగి ఉన్న ఆక్సిడేజ్లు కాబట్టి, లాక్కేస్ చర్యపై రాగి అయాన్ల ప్రభావాలు విభిన్నంగా ఉంటాయి మరియు అవి ఉత్తేజపరిచేవి, నిరోధించేవి నుండి తటస్థమైనవి వరకు ఉంటాయి.⁵¹ దీనికి విరుద్ధంగా, జౌ మరియు ఇతరులు. [52]నివేదించబడిందిCu²⁺తైవాన్ భూగర్భ చెదపురుగు (ఒడోంటోటర్మ్స్ ఫార్మోసానస్) యొక్క లాకేస్ చర్యను నిరోధించింది. అయితే, సెరెనా sp. HYB07 యొక్క లాకేస్లు[53]మరియు క్లిటోసైబ్ మాక్సిమా[54]రాగి అయాన్ల వల్ల ప్రభావితం కాలేదు.
సబ్స్ట్రేట్ విశిష్టతను దాని గతిశాస్త్ర పారామితుల (Km మరియు Vmax) ద్వారా సూచించారు; ఎంజైమ్కు సబ్స్ట్రేట్ యొక్క బంధన అనుబంధం ఎంత బలంగా ఉంటే, Km విలువ అంత తక్కువగా ఉంటుంది మరియు సబ్స్ట్రేట్ విశిష్టత అంత ఎక్కువగా ఉంటుంది.3,21,55గ్రాఫ్ప్యాడ్ ప్రిజం 6.0 సాఫ్ట్వేర్ను ఉపయోగించి లైనెవీవర్-బర్క్ ప్లాట్ (పటం 5) గీయడం ద్వారా *ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రియేటస్* NRC 620 నుండి లక్కేస్ యొక్క గతిశాస్త్ర పారామితులను (Km మరియు Vmax) నిర్ణయించారు. ABTSను సబ్స్ట్రేట్గా ఉపయోగించినప్పుడు, ఫలితాలు 1.99 mM మరియు 16217 μmolగా ఉన్నాయి.min⁻¹ L⁻¹,వరుసగా. ఎల్సయేద్ మరియు ఇతరులు.21ABTS ఆక్సీకరణకు Km విలువలు వరుసగా 0.1 mM మరియు 0.064 mM అని నివేదించబడింది, ఇది ABTS పట్ల Lac A మరియు Lac B ఐసోఎంజైమ్ల అధిక అనుబంధాన్ని సూచిస్తుంది. అంతేకాకుండా, Vmax విలువలు 0.182 μmolగా ఉన్నాయి.min⁻¹మరియు 0.603 μmolmin⁻¹వరుసగా. పొందిన Km విలువ Trametes polyzona WRF03 (8.66 mM) కంటే తక్కువగా ఉంది; అంతేకాకుండా, వాటి Vmax విలువ (1429 mmol min⁻¹) కూడాతక్కువABTS ను సబ్స్ట్రేట్గా ఉపయోగించినప్పుడు.33 అదేవిధంగా, లెంటినస్ స్క్వారోసులస్ MR13 మరియు ట్రామెట్స్ sp. AH28-2 లాకేస్ గాఢతల యొక్క Km విలువలు వరుసగా 0.0714 mM మరియు 0.025 mM, మరియు Vmax విలువలు 0.0091 mM min−1 మరియు 0.67 mM min−1 mg−1 (ABTS కు సాపేక్షంగా), వరుసగా.56,57
*ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రేటస్* NRC 620 నుండి లక్కేస్ యొక్క క్రియాశీలతపై ABTS గాఢత ప్రభావాన్ని పరిశోధించడం జరిగింది, మరియు ప్రారంభ చర్య వేగం యొక్క విలోమానికి మరియు ABTS గాఢతకు మధ్య సంబంధాన్ని చూపిస్తూ ఒక లైనెవీవర్-బర్క్ ప్లాట్ను గీయడం జరిగింది. గతిశాస్త్ర పారామితులను (Vmax మరియు Km) నిర్ధారించడానికి, pH 4.5 వద్ద వివిధ గాఢతలలో (0.025–3.0 mM) ఉన్న లక్కేస్తో ABTS యొక్క ఆక్సీకరణ చర్యను కొలవడం జరిగింది. చర్య వేగం యొక్క విలోమానికి మరియు సబ్స్ట్రేట్ గాఢతకు మధ్య సంబంధాన్ని చూపే లైనెవీవర్-బర్క్ ప్లాట్ను ఉపయోగించి మైఖేలిస్-మెంటెన్ గతిశాస్త్ర స్థిరాంకాలను లెక్కించడం జరిగింది. గ్రాఫ్ప్యాడ్ ప్రిజం 6.01 సాఫ్ట్వేర్ను ఉపయోగించి లైనెవీవర్-బర్క్ ప్లాట్ నుండి గతిశాస్త్ర స్థిరాంకాలను లెక్కించడం జరిగింది.
పెక్టినేజ్ల వంటి సాంప్రదాయ స్పష్టీకరణ ఎంజైమ్లు, పెక్టిక్ పదార్థాలను జలవిశ్లేషణ చేసి, చిక్కదనాన్ని మరియు మబ్బుతనాన్ని తగ్గిస్తాయి. అవి నిర్మాణాత్మక పాలిశాకరైడ్లను సమర్థవంతంగా విచ్ఛిన్నం చేస్తాయి మరియు దిగుబడిని, స్పష్టతను మెరుగుపరచడానికి తరచుగా సెల్యులేజ్లు మరియు హెమిసెల్యులేజ్ల వంటి ఇతర ఎంజైమ్లతో కలిపి ఉపయోగిస్తారు. అయితే, పెక్టినేజ్లు ప్రత్యేకంగా ఫినాలిక్ సమ్మేళనాలను లక్ష్యంగా చేసుకోవు. ముఖ్యంగా ఆపిల్ మరియు ద్రాక్ష రసం వంటి వాటిలో మబ్బుతనం మరియు ఆక్సీకరణ గోధుమ రంగుకు ఈ ఫినాలిక్ సమ్మేళనాలే ప్రధాన కారణాలు.58దీనికి విరుద్ధంగా, లాకేస్లు ఫినాలిక్ సమ్మేళనాల ఆక్సీకరణను ఉత్ప్రేరకపరుస్తాయి, వాటిని పెద్ద, కరగని అణువులుగా పాలిమరైజ్ చేస్తాయి, వీటిని అవక్షేపణ లేదా వడపోత ద్వారా తొలగించవచ్చు. ఈ విధానం స్పష్టతను మెరుగుపరచడమే కాకుండా, ఫినాలిక్ సమ్మేళనాల వల్ల కలిగే ఆక్సీకరణ బ్రౌనింగ్ సంభావ్యతను తగ్గించడం ద్వారా రసం యొక్క నిల్వ కాలాన్ని కూడా పొడిగిస్తుంది. అంతేకాకుండా, లాకేస్-ఆధారిత స్పష్టీకరణ ప్రక్రియలను తేలికపాటి ప్రాసెసింగ్ పరిస్థితులలో (pH 3.5–5.5, ఉష్ణోగ్రత 25–40 °C) నిర్వహించవచ్చు, ఇది వాటి పోషక లేదా ఇంద్రియ లక్షణాలకు ఎటువంటి హాని కలిగించకుండా సున్నితమైన రసాలకు వాటిని అనువుగా చేస్తుంది.59అధ్యయనాల ప్రకారం, పెక్టినేస్ చికిత్సతో 1–2 గంటల్లో రసాన్ని స్పష్టం చేయవచ్చు, అయితే ఫినాలిక్ సమ్మేళనాలను పూర్తిగా తగ్గించడానికి లాకేస్ చికిత్సకు సాధారణంగా ఎక్కువ చర్య సమయం (3–6 గంటలు) పడుతుంది. అయినప్పటికీ, ఎంజైమ్ను స్థిరీకరించడం ద్వారా లేదా లాకేస్ను యాంత్రిక స్పష్టీకరణ పద్ధతులతో కలపడం ద్వారా ఈ ప్రక్రియను మెరుగుపరచవచ్చు.60ఈ అధ్యయనంలో, ముడి సారం యొక్క ఎంజైమ్ ప్రొఫైలింగ్ గణనీయమైన లాకేస్ మరియు α-అమైలేస్ కార్యకలాపాలను వెల్లడించింది, అయితే పెక్టినేస్ మరియు జైలనేస్ కార్యకలాపాలు చాలా తక్కువగా ఉన్నాయి మరియు సెల్యులేస్ కార్యకలాపం గుర్తించబడలేదు. అందువల్ల, మబ్బుగా ఉండటం మరియు ఫినాలిక్ కంటెంట్లో తగ్గుదల ప్రధానంగా లాకేస్ చర్య వల్ల జరిగింది, అయితే స్నిగ్ధతలో మార్పు పాక్షికంగా అమైలేస్ చర్య వల్ల కావచ్చు.
పట్టిక 1 తాజాగా పిండిన ఆపిల్ రసం మరియు లాక్కేస్-ట్రీటెడ్ నమూనాల భౌతిక రసాయన పారామితులను చూపుతుంది. తాజాగా పిండిన ఆపిల్ రసం దిగుబడి (71.59%) లాక్కేస్-ట్రీటెడ్ నమూనాల దిగుబడి (87.34%) కంటే తక్కువగా ఉందని ఫలితాలు చూపించాయి. ఈ ఫలితాలు పిల్నిక్ మరియు ఆరెంజ్ యొక్క పరిశోధనలతో ఏకీభవిస్తున్నాయి.61పండ్ల ప్రాసెసింగ్లో ఎంజైమ్ల వాడకం రసం దిగుబడిని పెంచుతుందని, వడపోతను మెరుగుపరుస్తుందని, మరియు సాంద్రీకరణ కోసం అధిక-నాణ్యత, స్పష్టమైన రసాన్ని పొందవచ్చని సూచించారు. రసంలో కరిగే చక్కెరల పరిమాణం పెరగడం వల్ల రసం దిగుబడి ప్రధానంగా పెరుగుతుంది. పండ్ల ఎంజైమాటిక్ జలవిశ్లేషణ సమయంలో, ఉత్పత్తి యొక్క కణ గోడలలోని మెసోగ్లియా మరియు పెక్టిన్ నాశనం చేయబడి, తటస్థ చక్కెరలు మరియు ఆమ్లాలు వంటి కరిగే పదార్థాలుగా మార్చబడతాయి.62.ఎంజైమ్తో శుద్ధి చేసిన ఆపిల్ జ్యూస్ యొక్క pH విలువ నియంత్రణ సమూహం కంటే గణనీయంగా తక్కువగా ఉంది (P < 0.05), మరియు నిల్వ సమయంలో రెండు సమూహాల pH విలువ గణనీయంగా పెరిగింది (పట్టిక 1). ఈ ఫలితాలు మార్క్ మరియు ఇతరుల ఫలితాలతో ఏకీభవిస్తున్నాయి.63ఉష్ణ చికిత్స తర్వాత నిల్వ చేశాక జీడిపండు రసం యొక్క pH తగ్గిందని గమనించారు. ఎంజైమ్ చికిత్స తర్వాత పెక్టిన్ విచ్ఛిన్నం మరియు గాలక్టురోనిక్ ఆమ్లం ఏర్పడటం వల్ల నిల్వ సమయంలో pH పెరుగుదల సంభవించవచ్చు. ఎంజైమ్ చికిత్స చేసిన నమూనాల pH నిల్వ అంతటా 4.05 మరియు 4.31 మధ్య ఉండగా, చికిత్స చేయని ఆపిల్ రసం యొక్క pH 4.12 మరియు 4.33 మధ్య ఉంది.
ప్రాసెస్ చేయని మరియు లాక్కేస్-ట్రీటెడ్ నమూనాలు రెండింటిలోనూ మొత్తం ఆమ్లత్వం (TA) నిల్వ సమయం పెరిగే కొద్దీ తగ్గుతున్న ధోరణిని చూపించింది (పట్టిక 1). రసం నిల్వ సమయంలో సేంద్రీయ ఆమ్లాలు కార్బోహైడ్రేట్లుగా మారడం లేదా ఎంజైమాటిక్ చర్యలు, అలాగే ఆక్సీకరణం కారణంగా ఆమ్లత్వం తగ్గడానికి కారణమని చెప్పవచ్చు.64నియంత్రిత ఆపిల్ జ్యూస్ మరియు ఎంజైమ్తో శుద్ధి చేసిన నమూనాల మొత్తం ఆమ్లత్వం ఇతర జ్యూస్ల (స్ట్రాబెర్రీ జ్యూస్ 0.9%, ప్లమ్ జ్యూస్ 2.2%, కుమ్క్వాట్ జ్యూస్ 1.0%, ఆప్రికాట్ జ్యూస్ 2.4%, ఆరెంజ్ జ్యూస్ 0.8%) కంటే తక్కువగా ఉంది, కానీ ఇతర జ్యూస్ల (ఉదాహరణకు, పియర్ జ్యూస్ 0.3%)తో సమానంగా ఉంది.62శుద్ధి చేయని తాజాగా పిండిన ఆపిల్ రసంలోని ఈ తేడాలు పెరిగే పరిస్థితులు, జన్యుపరమైన కారకాలు, పరిపక్వత స్థాయి మరియు శుద్ధి చేసే పద్ధతులు వంటి వివిధ కారకాల వల్ల సంభవించవచ్చు.65నియంత్రిత మరియు లాక్కేస్-చికిత్స పొందిన ఆపిల్ రసంలో మొత్తం ఆమ్లత్వం తగ్గడం అనేది సింగ్ మరియు ఇతరులు సమర్పించిన ఫలితాలకు అనుగుణంగా ఉంది.6674 రోజుల నిల్వ తర్వాత జిన్ నువో ఆపిల్ జ్యూస్ మొత్తం ఆమ్లత్వంలో తగ్గుదల గురించి. మరోవైపు, ఓష్మియాన్స్కీ మరియు వోజ్డిలో67సాంప్రదాయ స్పష్టీకరణ పద్ధతుల ప్రభావాన్ని అధ్యయనం చేసినప్పుడు ఆపిల్ రసం యొక్క ఆమ్లత్వంలో ఎటువంటి గణనీయమైన మార్పులు కనుగొనబడలేదు.
పట్టిక 1లో అందించిన ఫలితాలు, లాక్కేస్-ట్రీట్మెంట్ చేసిన ఆపిల్ జ్యూస్లోని మొత్తం కరిగే ఘనపదార్థాల (TSS) విలువ, ట్రీట్మెంట్ చేయని నమూనా కంటే ఎక్కువగా ఉందని సూచిస్తున్నాయి. ఈ ఫలితాలు ప్రచురితమైన అధ్యయనాలతో ఏకీభవిస్తున్నాయి.. 68ఇంకా, పట్టిక 1 ప్రకారం నియంత్రణ ఆపిల్ జ్యూస్ సమూహం యొక్క TSS విలువ ప్రారంభ సమయంలో 9.58గా ఉండి, నిల్వ కాలం ముగిసేనాటికి 11.05కు చేరుకుంది. ఈ విలువలు హమీద్ మరియు ఇతరులు నివేదించిన తాజా ఆపిల్ జ్యూస్ యొక్క TSS విలువల కంటే తక్కువగా ఉన్నాయి.. 69(వరుసగా 11.2 మరియు 11.80). లాకేస్తో శుద్ధి చేసిన ఆపిల్ జ్యూస్ నమూనాల TSS విలువ 11.23 నుండి ప్రారంభమై, 4°C వద్ద రెండు వారాల నిల్వ తర్వాత 12.93కి చేరుకుని గణనీయంగా పెరిగింది (పట్టిక 1). నిల్వ సమయంలో సిట్రస్ పండ్లు, నిమ్మకాయలు మరియు తీపి నారింజలలో కూడా TSSలో ఇలాంటి పెరుగుదల గమనించబడింది. నిల్వ సమయంలో మొత్తం కరిగే ఘనపదార్థాలు (TSS) పెరగడానికి కారణాలు: పాలీశాకరైడ్లు (స్టార్చ్) మోనోశాకరైడ్లుగా (చక్కెరలు) జలవిశ్లేషణ చెందడం, జ్యూస్ నిర్జలీకరణం కారణంగా గాఢత పెరగడం, మరియు జ్యూస్లోని పెక్టిన్ కరిగే ఘనపదార్థాలుగా విచ్ఛిన్నం కావడం. హమెద్ మరియు ఇతరులు నివేదించినట్లుగా, మొత్తం కరిగే ఘనపదార్థాలు (TSS) పెరగడానికి కారణం కరిగే చక్కెరలు పెరగడమే కావచ్చు. ఈ చక్కెరలు, వరుసగా పెక్టిన్ లేదా సెల్యులేస్ ద్వారా పెక్టిన్ లేదా సెల్యులోజ్ కరిగే చక్కెరలుగా మారడం వల్ల గానీ, లేదా స్టార్చ్ చక్కెరలుగా జలవిశ్లేషణ చెందడం వల్ల గానీ ఏర్పడవచ్చు.69.ఆపిల్ జ్యూస్ లక్షణాలపై లాకేస్ ప్రభావాన్ని కంటితో గమనించవచ్చు, ఎందుకంటే లాకేస్తో శుద్ధి చేసిన ఆపిల్ జ్యూస్, శుద్ధి చేయని జ్యూస్ కంటే మెరుగైన ప్రవాహశీలతను మరియు తక్కువ స్నిగ్ధతను ప్రదర్శిస్తుంది. ఈ పరిశీలన పట్టిక 1లో నమోదు చేయబడింది; ఎంజైమ్తో శుద్ధి చేసిన నమూనా యొక్క స్నిగ్ధత 1.87 cP కాగా, నియంత్రణ నమూనా యొక్క స్నిగ్ధత 2.95 cPగా ఉంది. స్నిగ్ధతలో ఈ గణనీయమైన తగ్గుదలకు, పెక్టిన్ వంటి పదార్థాల అధిక జలనిలుపుదల సామర్థ్యం మరియు ఒక సంధాన వలయ నిర్మాణం ఏర్పడటమే కారణం కావచ్చు.
ఈ అధ్యయనంలో, స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్ను ఉపయోగించి 420 nm వద్ద అబ్సార్బెన్స్ను కొలవడం ద్వారా ఆపిల్ జ్యూస్ యొక్క బ్రౌనింగ్ ఇండెక్స్ (BI) పై లాకేస్ ప్రభావాన్ని పరిశోధించడం జరిగింది. ఫలితాలు పట్టిక 1లో చూపబడ్డాయి. నిల్వ సమయంలో, ట్రీట్ చేసిన మరియు ట్రీట్ చేయని రెండు గ్రూపులలోని ఆపిల్ జ్యూస్ నమూనాల BI క్రమంగా పెరుగుతున్న ధోరణిని చూపించింది. BI బ్రౌనింగ్ స్థాయిని ప్రతిబింబిస్తుంది మరియు దీనికి ఉపయోగపడుతుంది.ఒక ముఖ్యమైనఎంజైమాటిక్ మరియు నాన్-ఎంజైమాటిక్ బ్రౌనింగ్ ప్రతిచర్యల సూచిక. నిల్వ సమయంలో అబ్సార్బెన్స్ గణనీయంగా పెరిగింది (P < 0.05). నిల్వ చివరిలో,ఎ420నియంత్రణ మరియు ఎంజైమ్-చికిత్స పొందిన సమూహాలలో ఆపిల్ రసం నమూనాల విలువ వరుసగా సుమారు 217% మరియు 121% పెరిగింది (పట్టిక 1). ఎంజైమ్ చికిత్స బ్రౌనింగ్ స్థాయిని సుమారు 56% సమర్థవంతంగా తగ్గించగలదని ఫలితాలు సూచిస్తున్నాయి. బెజెర్రా మరియు ఇతరుల ఫలితాలు.[19మా ఫలితాలకు అనుగుణంగా ఉన్నాయి; వారు ఆపిల్ జ్యూస్ను స్పష్టం చేయడానికి లాకేస్-గ్లూటరాల్డిహైడ్-కొబ్బరి పీచును ఉపయోగించారు, దాని అసలు రంగును 61% తగ్గించారు.
పండ్ల రసాలలో ఉండే పాలిఫెనాల్స్ మానవ శరీరానికి సానుకూల పోషక మరియు చికిత్సా ప్రభావాలను కలిగి ఉన్నప్పటికీ, అవి ప్రోటీన్లతో చర్య జరిపి రసం మబ్బుగా మారడానికి, అవక్షేపం ఏర్పడటానికి లేదా అస్పష్టంగా మారడానికి కారణమవుతాయి. తద్వారా ఉత్పత్తి యొక్క రుచి మరియు సువాసనను మార్చి, దాని నిల్వ కాలాన్ని తగ్గిస్తాయి.71ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రేటస్ NRC 620 నుండి లభించే లాకేస్ను ఉపయోగించి ఆపిల్ జ్యూస్లోని ఫినాలిక్ సమ్మేళనాల పరిమాణాన్ని సురక్షితంగా తగ్గించడమే ఈ అధ్యయనం యొక్క లక్ష్యం. పట్టిక 1లో చూపిన ఫలితాల ప్రకారం, 4 °C వద్ద నిల్వ చేయడానికి ముందు లాకేస్తో శుద్ధి చేసిన ఆపిల్ జ్యూస్లోని మొత్తం ఫినాలిక్ సమ్మేళనాల పరిమాణం గణనీయంగా తగ్గింది. అంతేకాకుండా, అధ్యయనం చేసిన రెండు నమూనాలలోనూ నిల్వ సమయంలో మొత్తం ఫినాలిక్ సమ్మేళనాల పరిమాణం కూడా తగ్గింది (పట్టిక 1). సాండ్రి మరియు ఇతరుల పరిశోధన.72ఎంజైమ్తో శుద్ధి చేసిన ఆపిల్ రసం దాని యాంటీఆక్సిడెంట్ చర్యను మరియు ఫినోలిక్ సమ్మేళనాల కంటెంట్ను నిలుపుకోగలదని చూపించింది. అయితే, లెటెరా మరియు ఇతరుల అధ్యయనం యొక్క ఫలితాలు...73ఫంగల్ లాకేస్తో నారింజ రసాన్ని శుద్ధి చేయడం వల్ల దానిలోని ఫినాలిక్ సమ్మేళనాల పరిమాణాన్ని 45% వరకు తగ్గించవచ్చని తేలింది.
ఫినాలిక్ సమ్మేళనాలకు ఫ్రీ రాడికల్ స్కావెంజింగ్, సింగిల్ ఆక్సిజన్ రిడక్షన్ మరియు క్వెంచింగ్, హైడ్రోజన్ అణువు బదిలీ, మరియు ఫ్రీ రాడికల్స్కు ఎలక్ట్రాన్ దానం వంటి లక్షణాలు ఉన్నాయని నిరూపించబడింది, ఇవి వాటిని శక్తివంతమైన యాంటీఆక్సిడెంట్లుగా చేస్తాయి.74అందువల్ల, ఈ అధ్యయనంలో, 14 రోజుల పాటు రిఫ్రిజిరేటర్లో నిల్వ ఉంచిన ఆపిల్ జ్యూస్ యొక్క యాంటీఆక్సిడెంట్ చర్యపై లాకేస్ ప్రభావాన్ని అంచనా వేయడానికి DPPH మరియు FRAP-ఆధారిత పద్ధతులను ఉపయోగించారు (పట్టిక 2). రెండు పద్ధతులు నిల్వ సమయంలో యాంటీఆక్సిడెంట్ చర్యలో పెరుగుదలను చూపించాయి, ఇది స్వేచ్ఛా ఫినోలిక్ సమ్మేళనాల పెరుగుదల లేదా మైలార్డ్ రియాక్షన్ ఉత్పత్తుల (MRPs) ఏర్పడటం వల్ల కావచ్చు, యాంటీఆక్సిడెంట్ చర్యలో పెరుగుదలకు మైలార్డ్ రియాక్షన్ ఉత్పత్తులే కారణమయ్యే అవకాశం ఉంది.75ఎంజైమేతర బ్రౌనింగ్ చర్యలు (ఆస్కార్బిక్ ఆమ్ల విచ్ఛిన్నం, మైలార్డ్ చర్యలు మరియు చక్కెరల ఆమ్ల-ఉత్ప్రేరక విచ్ఛిన్నంతో సహా) గోధుమ వర్ణద్రవ్యాలను (మెలనోయిడిన్లను) ఉత్పత్తి చేస్తాయి. మధ్యంతర ఆస్కార్బిక్ ఆమ్ల విచ్ఛిన్న ఉత్పత్తులు మరియు చక్కెర విచ్ఛిన్న ఉత్పత్తులు (కార్బోనిల్ సమ్మేళనాల వంటివి) మైలార్డ్ చర్యల ద్వారా అమైనో ఆమ్లాలతో చర్య జరపగలవు.76నిల్వ సమయంలో పండ్లు, కూరగాయలు గోధుమ రంగులోకి మారడంపై విస్తృతంగా అధ్యయనం చేసినప్పటికీ, ఈ చర్యల గురించిన మన అవగాహన పరిమితంగానే ఉంది.77FRAP పద్ధతితో పోల్చినప్పుడు, లక్కేస్తో శుద్ధి చేసిన ఆపిల్ రసం DPPH పద్ధతి ద్వారా గణనీయంగా తక్కువ యాంటీఆక్సిడెంట్ కార్యాచరణను చూపించింది (పట్టిక 2), మరియు నిల్వ సమయం పెరిగే కొద్దీ అన్ని నమూనాల యాంటీఆక్సిడెంట్ కార్యాచరణ గణనీయంగా పెరిగింది. ఈ అధ్యయనంలో యాంటీఆక్సిడెంట్ కార్యాచరణను నిర్ధారించడానికి రెండు వేర్వేరు పద్ధతులను ఉపయోగించారు, ఎందుకంటే వాటి సూత్రాలు భిన్నంగా ఉంటాయి. DPPH పద్ధతి ఫ్రీ రాడికల్స్ను తటస్థీకరించే సామర్థ్యాన్ని కొలుస్తుంది, అయితే FRAP పద్ధతి ఐరన్ అయాన్లను తగ్గించే సామర్థ్యాన్ని కొలుస్తుంది. అందువల్ల, అధ్యయనం చేసిన నమూనాల యాంటీఆక్సిడెంట్ కార్యాచరణను మరింత బాగా అర్థం చేసుకోవడానికి, యాంటీఆక్సిడెంట్ కార్యాచరణను నిర్ధారించడానికి బహుళ పద్ధతులను ఉపయోగించాలని సిఫార్సు చేయబడింది.78
ఈ అధ్యయనం యొక్క ముఖ్యమైన ఫలితాలలో ఒకటి ఏమిటంటే, *ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రియేటస్* లాకేస్ NRC 620 70°C మరియు pH 3.0 వద్ద గరిష్ట క్రియాశీలతను ప్రదర్శిస్తుంది. రసం స్పష్టీకరణ కోసం సాధారణంగా ఉపయోగించే *ట్రామెట్స్ వెర్సికలర్* మరియు *గానోడెర్మా లూసిడమ్* లాకేస్ల వంటి ఇతర శిలీంధ్ర లాకేస్లతో పోలిస్తే, *పి. ఓస్ట్రియేటస్* NRC 620 అధిక ఉష్ణ స్థిరత్వాన్ని మరియు మరింత ఆమ్ల pHని ప్రదర్శిస్తుంది. *ట్రామెట్స్ వెర్సికలర్* మరియు *గానోడెర్మా లూసిడమ్* నుండి వచ్చే లాకేస్లు సాధారణంగా 50-60°C పరిధిలో మరియు 3.5 నుండి 5.0 మధ్య pH విలువల వద్ద గరిష్ట క్రియాశీలతను ప్రదర్శిస్తాయి. ఈ వ్యత్యాసం రసం స్పష్టీకరణ సామర్థ్యాన్ని మెరుగుపరచడానికి దోహదపడవచ్చు, ప్రత్యేకించి తక్కువ pH విలువల వద్ద స్థిరత్వం కీలకమైన ఆమ్ల రసాల విషయంలో. *పి. ఓస్ట్రియేటస్* యొక్క ప్రత్యేక లక్షణం... ఇతర అధ్యయనం చేయబడిన శిలీంధ్ర లాకేస్లతో పోలిస్తే, *ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రేటస్* NRC 620 మరింత సవాలుతో కూడిన పరిస్థితులలో సమర్థవంతంగా పనిచేసే సామర్థ్యాన్ని ప్రదర్శిస్తుంది. దీని అధిక అనుకూల క్రియాశీలత ఉష్ణోగ్రత, వేగవంతమైన ప్రతిచర్య రేట్లు మరియు తగ్గిన సూక్ష్మజీవుల కాలుష్యం వంటి పారిశ్రామిక అనువర్తనాలలో సంభావ్య ప్రయోజనాలను సూచిస్తుంది. దీని తక్కువ pH, అనేక రసాల ఆమ్ల స్వభావానికి బాగా సరిపోతుంది, ఇది రసం స్పష్టీకరణ ప్రక్రియలలో ఉపయోగకరంగా ఉండవచ్చు. ఈ ఫలితాలు పెద్ద ఎత్తున అనువర్తనం కోసం మరింత అన్వేషణను సమర్థిస్తాయి, తద్వారా *ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రేటస్* NRC 620 సాంప్రదాయ శిలీంధ్ర లాకేస్ వనరులకు ఆచరణీయమైన ప్రత్యామ్నాయంగా మారుతుంది. మునుపటి అధ్యయనాలతో పోలిస్తే, అనుకూల ఉష్ణోగ్రత 60°C మరియు అనుకూల pH 3.0 అని మేము కనుగొన్నాము. 60°C వద్ద 80 నిమిషాల పాటు ప్రతిచర్య తర్వాత, *గానోడెర్మా లూసిడమ్* లాకేస్ నిలుపుకుంది46దాని కార్యకలాపాలలో %.79 కుర్నియావతి మరియు నిసెల్ ప్రకారం80గనోడెర్మా లూసిడమ్ ఎంజైమ్లు 25°C వద్ద మరియు 5.0 నుండి 8.0 వరకు pH విలువల వద్ద అద్భుతమైన నుండి మధ్యస్థ స్థిరత్వాన్ని, మరియు 6.0 pH వద్ద మరియు 10 నుండి 30°C వరకు ఉష్ణోగ్రతల వద్ద స్థిరత్వాన్ని ప్రదర్శిస్తాయి. ఈ అధ్యయనంలో, ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రియేటస్ ఎంజైమ్ క్రియాశీలతకు అనువైన pH మరియు ఉష్ణోగ్రత వరుసగా 3.0 మరియు 70°C అని మేము కనుగొన్నాము. 40°C మరియు 50°C వద్ద రెండు గంటల పాటు ఇంక్యుబేషన్ చేసిన తర్వాత, ఎంజైమ్ దాని క్రియాశీలతలో వరుసగా 68.33% మరియు 59.61% నిలుపుకుంది. అంతేకాకుండా, ప్లూరోటస్ ఓస్ట్రియేటస్ NRC 620 లాకేస్ 50°C నుండి 80°C వరకు విస్తృత ఉష్ణోగ్రత పరిధిలో అధిక క్రియాశీలతను ప్రదర్శించింది, దాదాపు గరిష్ట క్రియాశీలతను (69%–98%) చేరుకుంది, 70°C వద్ద గరిష్ట క్రియాశీలత గమనించబడింది.
ముగింపుగా, స్థిర పరిస్థితులలో పొందిన ఆయిస్టర్ మష్రూమ్ లాకేస్ NRC620, వివిధ రకాల pH మరియు ఉష్ణోగ్రత పరిస్థితులలో ఉత్తమమైన క్రియాశీలతను మరియు స్థిరత్వాన్ని ప్రదర్శించింది, ఇతర ఎంజైమ్ వనరులతో పోలిస్తే ఇది ఉన్నతమైన స్థిరత్వాన్ని కనబరిచింది. 10 mM MgSO₄ మరియు CuSO₄ కలపడం వల్ల ఎంజైమ్ క్రియాశీలత వరుసగా సుమారు 21% మరియు 35% పెరిగింది. దీనిని ఆపిల్ జ్యూస్గా ప్రాసెస్ చేసినప్పుడు, ఈ ఎంజైమ్ pH మరియు స్నిగ్ధతను తగ్గించింది, అయితే నిల్వ సమయంలో ఫినాలిక్ పదార్థం స్వల్పంగా మాత్రమే తగ్గింది.
ఈ ఫలితాలు ఆహార పరిశ్రమలో, ముఖ్యంగా పానీయాల స్పష్టీకరణలో లాకేస్ యొక్క సామర్థ్యాన్ని ధృవీకరిస్తున్నాయి. ఫినాలిక్ సమ్మేళనాలను ప్రత్యేకంగా విచ్ఛిన్నం చేయడం ద్వారా, లాకేస్ మబ్బుదనాన్ని తగ్గించి, స్పష్టతను మెరుగుపరచడమే కాకుండా, తేలికపాటి నిర్వహణ పరిస్థితులలో పండ్ల రసాల నాణ్యతను కూడా కాపాడుతుంది. జెలటిన్, బెంటోనైట్ మరియు సిలికా జెల్ వంటి సాంప్రదాయ స్పష్టీకరణ కారకాల వలె కాకుండా, లాకేస్ వ్యర్థాలను ఉత్పత్తి చేయదు లేదా పానీయాల నుండి ఆహ్లాదకరమైన సువాసనలను తొలగించదు, అందువల్ల ఇది మరింత పర్యావరణ అనుకూలమైన మరియు సుస్థిరమైన ఎంపికగా నిలుస్తుంది. అంతేకాకుండా, ఇతర ఎంజైమ్లు మరియు వడపోత పద్ధతులతో పోలిస్తే, లాకేస్ ఉత్పత్తి నాణ్యతకు ఎటువంటి రాజీ పడకుండా లక్షిత మరియు తక్కువ ఖర్చుతో కూడిన పరిష్కారాన్ని అందిస్తుంది.
క్యోముహింబో, హెచ్డి మరియు బ్రింక్, హెచ్జి. రాగి-కలిగిన లాకేస్ల అనువర్తనాలు మరియు స్థిరీకరణ వ్యూహాలు; ఒక సమీక్ష. హెలియాన్ 9, e13156 (2023).
పోస్ట్ సమయం: డిసెంబర్-15-2025